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    法氏囊抗體檢測的原理及方法
    更新時間:2021-04-15 點擊量:2309
      法氏囊抗體檢測可溶性抗原和抗體的可以在瓊脂凝膠中擴散,當抗原、抗體相遇時發生特異性結合,在較適處發生沉淀,此沉淀物因顆粒較大而不擴散,形成肉眼可見的白色沉淀帶。
     
      法氏囊抗體檢測的材料與試劑:
     
      普通瓊脂平板、打孔器、針頭、加樣槍、槍頭、V型血凝板、玻璃板、生理鹽水
     
      雞法氏囊陽性血清、法氏囊標準抗原、待檢卵黃抗體/血清
     
      法氏囊抗體檢測的方法:
     
      1.瓊脂板的制備:
     
      1g優質瓊脂溶于含0.1%石炭酸的8%氯化鈉溶液100ml。用時倒在平皿內或置于玻片上,瓊脂厚度2.5~3mm。
     
      2.打孔:
     
      用打孔器在瓊脂平板上打孔,中央1個孔,周圍6個孔,形成梅花形圖案。
     
      要求:孔徑4mm,孔距3mm。
     
      3.挑出孔內瓊脂。
     
      4. 封底:在火焰上緩緩加熱,使孔底的瓊脂略熔化封底,避免加樣后液體從孔底滲漏。
     
      5.卵黃液進行倍比稀釋。
     
      V型板先在一排每孔加生理鹽水50μl,再在一孔加50μl的卵黃液, 反復吹吸3次后,吸50μl混和液加入第2孔,吹吸混勻,依次倍比 稀釋至第4孔……較后一孔吸50μl棄去,這樣1至4孔的抗體稀釋倍數依次為1:2、1:4、1:8和1:16……。
     
      6.加樣:
     
      在中心孔加法氏囊標準抗原約50μl。第1孔加法氏囊標準陰性血清;第2孔加法氏囊標準陽性血清。3、4、5、6孔分別加原液、1:2、1:4、1:8、1:16……的待檢卵黃液。每孔以加滿為度。
     
      7.加畢后,蓋上平皿蓋,將平皿翻過來,置濕盤中,在37℃下自由擴散24-48小時。
     
      結果判定:
     
      若待檢血清與抗原孔之間出現白色沉淀線,則表示陽性,若不出現沉淀線,為陰性。
     
      若用于檢測血清效價,則以出現沉淀線的血清較高稀釋倍數表示(2n)。
     
      用于兩種抗原比較時,沉淀線有多種情形,應具體分析。

    滬公網安備 31011802001677號