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    凋亡檢測(cè)試劑盒說明書
    更新時(shí)間:2020-11-20 點(diǎn)擊量:3300

     

    Annexin V-Alexa Fluor 488/PI 凋亡檢測(cè)試劑盒說明書

     

    Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit 

     

    目錄號(hào):K2576     

    保存:2-8  ℃避光保存 

     

    組分說明

     

    Cat.No.                      K2576

    KitSize                        50

    4×BindingBuffer                10ml

    PropidiumIodide,PI             500 μl

    AnnexinV-AlexaFluor488         250 μl

     

    產(chǎn)品簡(jiǎn)介 

     

       AnnexinV-AlexaFluor488/PI 凋亡檢測(cè)試劑盒是一種采用                AnnexinV-AlexaFluor488 與PI 雙染法進(jìn)行細(xì)胞早期凋亡分析的檢測(cè)試劑盒。

       細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面,這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外,使PS暴露在細(xì)胞膜外表面。PS 是一種帶負(fù)電荷的磷脂,正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面,在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對(duì)稱性被破壞而使 PS 暴露在細(xì)胞膜外。AnnexinV 具有易于結(jié)合到磷脂類如 PS 的特性,對(duì) PS 有高度的親和性。因此,該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測(cè)暴露在細(xì)胞膜表面的 PS。PS 轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所*的,也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的,而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細(xì)胞非透過性熒光染料碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)不能通過完整的活細(xì)胞,但能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募?xì)胞進(jìn)行染色,因此通常將AnnexinV 與  PI 配合染色,以區(qū)別凋亡早期細(xì)胞與壞死細(xì)胞和凋亡的晚期細(xì)胞。

     

    注意事項(xiàng) 

     

    1.  消化細(xì)胞時(shí)不能用含EDTA 的胰酶。 

    2.  本試劑盒需使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

    3.  需自備PBS 和去離子水。

    4.  熒光染料均存在淬滅問題,保存和使用過程中請(qǐng)盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

    5.  PI 對(duì)人體有刺激性,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

    6.  請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

     

    操作步驟 

     

    1. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:

     

        a. 對(duì)于貼壁細(xì)胞:小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細(xì)胞,至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時(shí),加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下所有的貼壁細(xì)胞,并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g 左右離心3-5 分鐘,沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞,如果細(xì)胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50μl 左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞,小心吸除上清。再次加入1ml4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞。

        b. 對(duì)于懸浮細(xì)胞:1000×g 左右離心3-5 分鐘,沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞,如果細(xì)胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約                            50 微升左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,并轉(zhuǎn)移到1.5 毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞,小心吸除上清,可以殘留約                                50μl 左右的   PBS,以避免吸走細(xì)胞。再次加入1ml4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞。

    2. 用去離子水按 1:4 稀釋BindingBuffer(4mlBindingBuffer+12ml 去離子水);

    3. 用 250μlBindingBuffer 重新懸浮細(xì)胞,調(diào)節(jié)其濃度為 1×106/ml;

    4. 取100μl 的細(xì)胞懸液于 5ml 流式管中,加入5μlAnnexinV-AlexaFluor488 和             10 μl20μg/ml 的 PI 溶液;

    5. 混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘;

    6. 在反應(yīng)管中加 400μlPBS,流式細(xì)胞儀(FACS)分析。

    

     

    

     

    實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

    ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

    CCK8檢測(cè)

    HE染色

    蛋白相互作用分析

    Western Blot

    免疫組化IHC染色

    熒光定量PCR

    動(dòng)物模型服務(wù)

    流式細(xì)胞檢測(cè)

    免疫熒光染色

    激光共聚焦

    DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

    石蠟/冰凍切片

    透射電鏡服務(wù)

    掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

    蛋白雙向(2-D)

    動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

    免疫共沉淀

    原位雜交(FIsh)

    蛋白質(zhì)純化

    分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

    組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

     

    蛋白雙向2D-WB

     

    藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

     

    番紅O固綠染色

    明膠酶譜MMP

    酶活性檢測(cè)

    動(dòng)物造模/模型實(shí)驗(yàn)服務(wù)

     

    滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)